Sensore di flusso microfluidico bidirezionale FLUIGENT ODROPSEQFPCK

Specifiche del prodotto

• Nome del prodotto: DropSeq Fluidic
• Numero parte: ODROPSEQFPCK
• Versione: ottobre 20

Informazioni sul prodotto

Il protocollo DropSeq Fluidic mira a spiegare come replicare la parte fluidica del protocollo Macosco DropSeq utilizzando i controllori di pressione Fluigent invece delle pompe a siringa. L'advancedtagIl vantaggio dei regolatori di pressione è la rapidità dei tempi di risposta, che consente la generazione rapida di goccioline. Il controllo della pressione consente di produrre goccioline della giusta dimensione in meno di due secondi. Inoltre, i sensori di flusso consentono il controllo diretto del flusso, imitando il funzionamento di una pompa a siringa.

Materiali e metodi:
Per implementare questo protocollo, avrai bisogno dei seguenti materiali:

• Pacchetto DropSeq
• Prodotto esterno (facoltativo)
• Vari componenti come elencati nella descrizione del contenuto

Istruzioni per l'uso del prodotto

Preparazione del dispositivo per un nuovo esperimento:

1. Controllare i dispositivi PDMS prima dell'uso.
2. Staccare una piccola area della pellicola che ricopre i generatori.
3. Aggiungere una goccia di dSURFan o di un tensioattivo alternativo nello scarico e attendere.
4. Collegare il tubo al dispositivo microfluidico.
5. Applicare una leggera pressione utilizzando Flow-EZ.
6. Attendere che il fluido fuoriesca dagli ingressi/uscite e riportare la pressione a 0 mbar.
7. Avviare gli agitatori a vortice e applicare pressione ai serbatoi finché non fuoriesce il fluido.
8. Collegare tutti i tubi secondo lo schema.

Avvio di un esperimento:
Dopo aver effettuato la connessione corretta, avviare un'esecuzione DropSeq applicando pressioni a diversi serbatoi utilizzando il software AiO. Le goccioline dovrebbero formarsi in pochi secondi.

Controllo della portata:
Con un'unità di flusso, utilizzare Flow-EZ come pompa a siringa. Il software AiO consente di gestire i comandi di portata, regolando le pressioni di conseguenza. Salvare la configurazione della pressione una volta impostata.

OBIETTIVO DEL PROTOCOLLO

• Questo protocollo ha lo scopo di spiegare come riprodurre la parte fluidica del protocollo Macosco DropSeq utilizzando i regolatori di pressione Fluigent al posto delle pompe a siringa.
• Il vantaggio principaletagLa caratteristica principale dei regolatori di pressione è la rapidità di risposta. Utilizzando il controllo della pressione, è possibile generare gocce della dimensione corretta in meno di due secondi. Utilizzando i sensori di flusso, è anche possibile utilizzare il controllo diretto del flusso per utilizzare il regolatore di pressione allo stesso modo di una pompa a siringa.

MATERIALI E METODI

Per realizzare questo protocollo, è necessario il seguente materiale:

Descrizione del contenuto del riferimento del prodotto
Pacchetto DropSeq	ODROPSEQFPCK	3 *Flusso EZ 2 bar
		1 *Collegamento
		1 *Confezione da 15 ml
		2 *Confezione da 2 ml
		2 *Unità di flusso M
		1 *Unità di flusso L
		Chip DropSeq PDMS contenente 23 design
		Kit di alimentazione Flow EZ
		2*Kit a bassa portata
		Kit alta portata
		Kit di collegamento e tubi DropSeq
Prodotto opzionale	IMCA001	Microscopio digitale ad alta velocità
	DR-RE-SU-12	12 ml dSURF
	FLPG+	Fonte di pressione
Prodotto esterno	Perline con codice a barre	Perle con codice a barre: Chemgenes CSO-2011*
	Miscelatore Vortex	Miscelatore Vortex: Sigma, Fisher Scientific…

Il primo passo è ricreare la seguente configurazione.

PROTOCOLLO

Preparazione del dispositivo per un nuovo esperimento
Quando si inizia un nuovo esperimento, si consiglia di espellere tutta l'aria dal chip e dal tubo. Per farlo, seguire i seguenti passaggi:

1. Prima di utilizzare i dispositivi PDMS, si prega di controllare attentamente i generatori. Per qualsiasi dubbio o domanda, non esitate a contattarci.
2. Non staccare completamente la pellicola all'inizio: tagliare la piccola area per ogni generatore da utilizzare. (Tutti i nostri chip PDMS sono ricoperti da una pellicola sigillante, una pellicola sigillante porosa idrofobica con adesivo di grado medico per piastre di coltura tissutale.)
3. Aggiungere una goccia di dSURF (o olio fluorurato con altro tensioattivo se non si utilizza dSURF) nell'uscita prima di iniziare l'esperimento e attendere alcuni minuti. Aumentare gradualmente la portata dell'olio fluorurato e delle fasi acquose. Evitare di passare direttamente da 0 a ~14 mL/h (o alla portata massima).
4. Collegare il tubo dSURF (o l'olio fluorurato con altro tensioattivo se non si utilizza dSURF) alla porta di ingresso corretta sul dispositivo microfluidico.
5. Applicare una piccola pressione utilizzando Flow-EZ (circa 200 mbar dovrebbero essere sufficienti)
6. Attendere finché non si vede uscire un po' di olio dalle entrate/uscite aperte del chip, quindi riportare la pressione a 0 mbar.
7. Avviare gli agitatori a vortice e applicare una piccola pressione agli altri due serbatoi finché non si vede una piccola goccia di fluido fuoriuscire dall'estremità del tubo.
8. Arrestare tutte le pressioni e collegare tutti i tubi secondo lo schema

Avvio di un esperimento
Una volta collegato correttamente il dispositivo, avviare un'esecuzione DropSeq è rapidissimo. È sufficiente applicare le seguenti pressioni ai diversi serbatoi utilizzando il software AiO. Le goccioline dovrebbero apparire in meno di pochi secondi.

• P (Olio) = 1300 mbar
• P (Cellule) = 540 mbar
• P (Perline) = 580 mbar
  Queste pressioni dovrebbero generare goccioline di circa 90-130 µm, il che porta a velocità di incapsulamento da 1 a 3).
  Mancia:
  Utilizzando il software AiO, le configurazioni di pressione possono essere facilmente salvate. Ciò consente di impostare tutte le pressioni su un determinato punto contemporaneamente.

Controllo della portata

• In combinazione con un'unità di flusso, Flow-EZ può essere utilizzato esattamente come una pompa a siringa. Il software AiO consente di impostare la portata. Un circuito di feedback sulla portata regola quindi le pressioni al valore corretto. Questa tecnica può essere utile per valutare le pressioni necessarie per l'esperimento.
• Una volta raggiunta la configurazione corretta, è possibile salvare la configurazione della pressione.

  

Per ulteriori informazioni, contattateci via email: contact@fluigent.com o consultate il nostro websito: www.fluigent.com.

Domande frequenti

Con quale velocità si possono generare goccioline utilizzando i regolatori di pressione?

Utilizzando regolatori di pressione è possibile generare goccioline della giusta dimensione in meno di due secondi.

Posso utilizzare il controllo diretto del flusso con questo protocollo?

Sì, i sensori di flusso consentono un controllo diretto del flusso, simile all'utilizzo di una pompa a siringa.

Documenti / Risorse

Sensore di flusso microfluidico bidirezionale FLUIGENT ODROPSEQFPCK [pdf] Manuale di istruzioni ODROPSEQFPCK, IMCA001, DR-RE-SU-12, Sensore di flusso microfluidico bidirezionale ODROPSEQFPCK, ODROPSEQFPCK, Sensore di flusso microfluidico bidirezionale, Sensore di flusso microfluidico, Sensore di flusso

Riferimenti

• Manuale d'uso